ⅠNអាស៊ីត ukleiciការណែនាំ
អាស៊ីត nucleic ត្រូវបានបែងចែកទៅជាអាស៊ីត deoxyribonucleic (DNA) និងអាស៊ីត ribonucleic (RNA) ដែលក្នុងនោះ RNA ត្រូវបានបែងចែកទៅជា ribosomal RNA (rRNA) messenger RNA (mRNA) និងផ្ទេរ RNA (tRNA) ទៅតាមមុខងារផ្សេងៗរបស់វា។DNA ត្រូវបានប្រមូលផ្តុំជាចម្បងនៅក្នុងស្នូល mitochondria និង chloroform ខណៈដែល RNA ត្រូវបានចែកចាយជាចម្បងនៅក្នុង cytoplasm ។ក្នុងនាមជាមូលដ្ឋានសម្ភារៈនៃការបញ្ចេញហ្សែន ការទាញយកអាស៊ីត nucleic ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការស្រាវជ្រាវជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល និងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យម៉ូលេគុលគ្លីនិក។ការផ្តោតអារម្មណ៍ និងភាពបរិសុទ្ធនៃការទាញយកអាស៊ីត nucleic នឹងប៉ះពាល់ដោយផ្ទាល់ទៅលើ PCR ជាបន្តបន្ទាប់ ការបង្កើតវ៉ិចទ័រ ការរំលាយអាហារអង់ស៊ីម និងការពិសោធន៍ផ្សេងៗទៀត។
Ⅱ វិធីសាស្រ្តចម្រាញ់ និងបន្សុទ្ធអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរ
① វិធីសាស្រ្តទាញយកសារធាតុ Phenol/chloroform
ការទាញយក Phenol/chloroform គឺជាវិធីសាស្រ្តបុរាណសម្រាប់ការទាញយក DNA ដែលភាគច្រើនប្រើសារធាតុរំលាយសរីរាង្គពីរផ្សេងគ្នាដើម្បីព្យាបាលសំណាក ការរំលាយអាស៊ីត nucleic ដែលមានមូលដ្ឋានលើ DNA ក្នុងដំណាក់កាលទឹក lipid ក្នុងដំណាក់កាលសរីរាង្គ និងប្រូតេអ៊ីនរវាងដំណាក់កាលទាំងពីរ។វិធីសាស្រ្តនេះមានគុណសម្បត្តិនៃការចំណាយទាបភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់និងប្រសិទ្ធភាពល្អ។គុណវិបត្តិគឺប្រតិបត្តិការស្មុគស្មាញនិងរយៈពេលយូរ។
② វិធីសាស្ត្រ Trizol
វិធីសាស្ត្រ Trizol គឺជាវិធីសាស្ត្របុរាណសម្រាប់ការទាញយក RNA ។វិធីសាស្រ្ត Trizol ត្រូវបានបែងចែកទៅជាដំណាក់កាល aqueous និងដំណាក់កាលសរីរាង្គបន្ទាប់ពីការ centrifugation ជាមួយ chloroform ដែលក្នុងនោះ RNA ត្រូវបានរំលាយក្នុងដំណាក់កាល aqueous ដំណាក់កាល aqueous ត្រូវបានផ្ទេរទៅបំពង់ EP ថ្មី ទឹកភ្លៀងត្រូវបានទទួលបន្ទាប់ពីបន្ថែម isopropanol ហើយបន្ទាប់មកការបន្សុតអេតាណុល។វិធីសាស្រ្តនេះគឺសមរម្យសម្រាប់ការទាញយក RNA ពីជាលិកាសត្វ កោសិកា និងបាក់តេរី។
③ វិធីសាស្រ្តបន្សុតជួរឈរ centrifugal
វិធីសាស្រ្តបន្សុតជួរឈរ centrifuge អាចស្រូបយក DNA យ៉ាងជាក់លាក់តាមរយៈសមា្ភារៈ adsorption ម៉ាទ្រីសស៊ីលីកុនពិសេស ខណៈពេលដែល RNA និងប្រូតេអ៊ីនអាចឆ្លងកាត់យ៉ាងរលូន ហើយបន្ទាប់មកប្រើអំបិលទាប PH ដើម្បីផ្សំអាស៊ីត nucleic អំបិលទាប PH ខ្ពស់ elution ដើម្បីបំបែក និងបន្សុទ្ធអាស៊ីត nucleic ។គុណសម្បត្តិគឺកំហាប់បន្សុតខ្ពស់ ស្ថេរភាពខ្ពស់ មិនត្រូវការសារធាតុរំលាយសរីរាង្គ និងតម្លៃទាប។គុណវិបត្តិគឺថាវាត្រូវការ centrifuged មួយជំហានម្តង ៗ ជំហានប្រតិបត្តិការបន្ថែមទៀត។
④ វិធីសាស្រ្តអង្កាំម៉ាញេទិក
វិធីសាស្ត្រអង្កាំម៉ាញេទិកគឺដើម្បីបំបែកគំរូជាលិកាកោសិកាតាមរយៈ lysate បញ្ចេញអាស៊ីត nucleic នៅក្នុងគំរូ ហើយបន្ទាប់មកម៉ូលេគុលអាស៊ីត nucleic ត្រូវបានស្រូបយកយ៉ាងជាក់លាក់នៅលើផ្ទៃនៃ bead ម៉ាញេទិក ខណៈពេលដែលមិនបរិសុទ្ធដូចជាប្រូតេអ៊ីន និងជាតិស្ករត្រូវបានទុកនៅក្នុង រាវ។តាមរយៈជំហាននៃការបំបែកជាលិកាកោសិកា ការចងមេដែកជាមួយអាស៊ីត nucleic ការលាងអាស៊ីត nucleic ការបញ្ចេញអាស៊ីត nucleic ជាដើម ទីបំផុតអាស៊ីត nucleic សុទ្ធត្រូវបានទទួល។គុណសម្បត្តិគឺប្រតិបត្តិការសាមញ្ញ និងការប្រើប្រាស់រយៈពេលខ្លី ដោយមិនចាំបាច់មាន centrifugation ជំហាន។វាមានតម្រូវការបច្ចេកទេសទាប ហើយអាចដឹងពីប្រតិបត្តិការដោយស្វ័យប្រវត្តិ និងទ្រង់ទ្រាយធំ។ការរួមបញ្ចូលគ្នាជាក់លាក់នៃមេដែក និងអាស៊ីត nucleic ធ្វើឱ្យអាស៊ីត nucleic ចម្រាញ់ជាមួយនឹងកំហាប់ខ្ពស់ និងភាពបរិសុទ្ធ។គុណវិបត្តិគឺថាតម្លៃទីផ្សារបច្ចុប្បន្នមានតម្លៃថ្លៃ។
⑤ វិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀត។
បន្ថែមពីលើវិធីសាស្រ្តទាំងបួនខាងលើ ក៏មានការប្រេះស្ងោរ វិធីសាស្ត្រអំបិលប្រមូលផ្តុំ វិធីសាស្ត្របន្សាប anionic វិធីសាស្ត្រ ultrasonic និងវិធីសាស្ត្រ enzymatic ជាដើម។
Ⅲ ប្រភេទនៃការទាញយកអាស៊ីត nucleic
Foregene មានវេទិកា Direct PCR ឈានមុខគេរបស់ពិភពលោក ដែលជាវេទិកាដាច់ដោយឡែក RNA ជួរឈរទ្វេ (DNA-only + RNA តែប៉ុណ្ណោះ)។ផលិតផលសំខាន់ៗរួមមានឧបករណ៍ញែក DNA/RNA, PCR និង Direct PCR reagents ស៊េរី reagents មន្ទីរពិសោធន៍ម៉ូលេគុល។
① ការទាញយក RNA សរុប
សំណាកការទាញយក RNA សរុបរួមមាន ឈាម កោសិកា ជាលិកាសត្វ រុក្ខជាតិ មេរោគ។ល។ ភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់ និងកំហាប់ខ្ពស់នៃ RNA សរុបអាចទទួលបានតាមរយៈការស្រង់ចេញ RNA សរុប ដែលអាចត្រូវបានប្រើក្នុង RT-PCR ការវិភាគបន្ទះឈីប ការបកប្រែក្នុង vitro ។ ការក្លូនម៉ូលេគុល Dot Blot និងការពិសោធន៍ផ្សេងៗទៀត។
ហ្សែនដែលទាក់ទងឧបករណ៍ញែក RNA
ឧបករណ៍ញែក RNA សរុបរបស់សត្វ--ទាញយក RNA សរុបដែលមានភាពបរិសុទ្ធ និងគុណភាពខ្ពស់យ៉ាងរហ័ស និងមានប្រសិទ្ធភាពពីជាលិកាសត្វផ្សេងៗ។
សំណុំកោសិកាដាច់ពីគ្នា RNA សរុប--RNA សរុបដែលបន្សុត និងគុណភាពខ្ពស់អាចទទួលបានពីកោសិកាវប្បធម៌ផ្សេងៗក្នុងរយៈពេល 11 នាទី។
Plant Total RNA Isolation Kit--ទាញយក RNA សរុបដែលមានគុណភាពខ្ពស់យ៉ាងឆាប់រហ័សពីសំណាករុក្ខជាតិដែលមានសារធាតុ polysaccharide និង polyphenol ទាប។
ឧបករណ៍ញែកមេរោគ RNA--ញែក និងបន្សុត RNA មេរោគយ៉ាងឆាប់រហ័ស ពីសំណាកដូចជាប្លាស្មា សេរ៉ូម សារធាតុរាវក្នុងខ្លួនដែលមិនមានកោសិកា និងសារធាតុចិញ្ចឹមកោសិកា។
② ការទាញយក DNA ហ្សែន
គំរូទាញយក DNA ហ្សែនរួមមានដី លាមក ឈាម កោសិកា ជាលិកាសត្វ រុក្ខជាតិ មេរោគ។ល។ ការស្រង់ចេញ DNA ហ្សែនអាចត្រូវបានប្រើក្នុងការរំលាយអាហារអង់ស៊ីម ការបង្កើតបណ្ណាល័យ DNA PCR ការរៀបចំអង្គបដិប្រាណ ការវិភាគបង្កាត់ប្លុកបស្ចិមប្រទេស បន្ទះឈីបហ្សែន កម្រិតខ្ពស់ - ដំណើរការតាមលំដាប់លំដោយ និងការពិសោធន៍ផ្សេងៗ។
ហ្សែនដែលទាក់ទងកញ្ចប់ DNA ដាច់ដោយឡែក
ឧបករណ៍ញែក DNA ជាលិកាសត្វ--ការទាញយក និងបន្សុតយ៉ាងរហ័សនៃ DNA ហ្សែនពីប្រភពជាច្រើន ដូចជាជាលិកាសត្វ កោសិកាជាដើម។
កញ្ចប់ DNA Midi ឈាម (1-5ml)- សម្អាត DNA ហ្សែនដែលមានគុណភាពខ្ពស់យ៉ាងឆាប់រហ័សពីឈាមប្រឆាំងនឹងការកកឈាម (1-5ml) ។
Buccal Swab/FTA Card កញ្ចប់ DNA Isolation- សម្អាត DNA ហ្សែនដែលមានគុណភាពខ្ពស់យ៉ាងឆាប់រហ័សពីគំរូ buccal swab / FTA Card ។
កញ្ចប់ DNA ដាច់ដោយឡែកពីរុក្ខជាតិ- សម្អាតយ៉ាងរហ័ស និងទទួលបាន DNA ហ្សែនដែលមានគុណភាពខ្ពស់ពីសំណាករុក្ខជាតិ (រួមទាំងសំណាករុក្ខជាតិ polysaccharides និង polyphenol)
③ ការទាញយកប្លាស្មា
Plasmid គឺជាប្រភេទនៃ DNA ម៉ូលេគុលតូចរាងជារង្វង់នៅក្នុងកោសិកា ដែលជាក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនទូទៅសម្រាប់ការផ្សំ DNA ឡើងវិញ។វិធីសាស្រ្តនៃការទាញយក plasmid គឺដើម្បីយក RNA បំបែក plasmid ពី DNA ហ្សែនរបស់បាក់តេរី និងយកប្រូតេអ៊ីន និងសារធាតុមិនបរិសុទ្ធផ្សេងទៀត ដើម្បីទទួលបាន plasmid សុទ្ធ។
កញ្ចប់ទូទៅ Plasmid Mini- សម្អាត DNA plasmid ដែលមានគុណភាពខ្ពស់យ៉ាងឆាប់រហ័សពីបាក់តេរីដែលបានបំប្លែងសម្រាប់ការពិសោធន៍ជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលជាប្រចាំដូចជាការផ្លាស់ប្តូរ និងការរំលាយអាហារអង់ស៊ីម
④ ប្រភេទទាញយកផ្សេងទៀត ការទាញយក miRNA ជាដើម។
ឧបករណ៍ញែក miRNA សត្វ- ទាញយកបំណែក RNA តូចៗនៃ 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA យ៉ាងរហ័ស និងប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពពីជាលិកា និងកោសិកាសត្វផ្សេងៗ
Ⅳ តម្រូវការសម្រាប់ការទាញយកអាស៊ីត nucleic និងការបន្សុតលទ្ធផលs
① ដើម្បីធានាបាននូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធបឋមនៃអាស៊ីត nucleic ។
② កាត់បន្ថយការជ្រៀតជ្រែកនៃប្រូតេអ៊ីន ជាតិស្ករ lipid និង macromolecules ផ្សេងទៀត។
③ មិនគួរមានសារធាតុរំលាយសរីរាង្គ ឬកំហាប់ខ្ពស់នៃអ៊ីយ៉ុងដែកដែលអាចរារាំងអង់ស៊ីមក្នុងសំណាកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកនោះទេ។
④ RNA និងការចម្លងរោគនៃអាស៊ីត nucleic ផ្សេងទៀតគួរតែត្រូវបានលុបចេញនៅពេលទាញយក DNA និងច្រាសមកវិញ។
ពេលវេលាផ្សាយ៖ ២៤-វិច្ឆិកា-២០២២
